小鼠雜交瘤細胞(抗LFA-1,Mac-1β亞基)
小鼠雜交瘤細胞(抗LFA-1,Mac-1β亞基)(Mouse Hybridoma Cell Line, Anti-LFA-1/Mac-1 β Subunit),由免疫Balb/C小鼠脾臟B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞經(jīng)PEG誘導融合、HAT選擇性培養(yǎng)及克隆化篩選獲得,經(jīng)ELISA、Western blot、免疫熒光驗證,可穩(wěn)定分泌特異性抗小鼠LFA-1(淋巴細胞功能相關(guān)抗原1)和Mac-1(巨噬細胞抗原1)共同β亞基(CD18)的單克隆抗體,無HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、真菌污染。該細胞系呈半貼壁生長(輕微附著,可通過輕柔吹打分離),核心特征是兼具B淋巴細胞的抗體分泌能力與骨髓瘤細胞的無限增殖特性,分泌的抗體可特異性結(jié)合CD18,阻斷LFA-1/CD18、Mac-1/CD18信號通路,進而抑制免疫細胞黏附、遷移及炎癥反應;廣泛應用于免疫細胞功能研究、炎癥機制探索、CD18蛋白檢測、免疫抑制劑篩選及相關(guān)診斷試劑研發(fā),是免疫學、細胞生物學、炎癥醫(yī)學基礎(chǔ)科研與臨床轉(zhuǎn)化的核心工具細胞,可輔助探索CD18異常表達與自身免疫性疾病、炎癥性疾病的關(guān)聯(lián)機制。
檢測原理
本細胞系的核心培養(yǎng)原理,聚焦雜交瘤細胞的融合特性與特異性抗體分泌需求,結(jié)合抗CD18抗體篩選要點:采用含胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(添加HEPES調(diào)節(jié)pH),補充HAT選擇性成分(抑制未融合骨髓瘤細胞增殖),后期可更換HT培養(yǎng)基維持細胞生長,保障細胞增殖與抗CD18抗體穩(wěn)定分泌;半貼壁生長特性無需特殊包被培養(yǎng)器皿,輕微附著細胞可通過輕柔吹打分離;37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱保障細胞代謝與抗體分泌穩(wěn)定,避免溫度波動影響細胞活性與抗體效價。培養(yǎng)流程規(guī)范:復蘇后按1×10?–2×10? cells/cm2接種,靜置4–6小時完成輕微貼壁,輕柔混勻后繼續(xù)培養(yǎng);換液時操作輕柔,避免劇烈震蕩導致細胞脫落,每2–3天更換新鮮培養(yǎng)基;傳代時無需yi酶消化,輕柔吹打使細胞脫落,離心后重懸接種,維持細胞指數(shù)生長期(培養(yǎng)15~20小時),最da細胞密度不超過5×10? cells/ml;可通過ELISA法、免疫熒光法檢測細胞培養(yǎng)上清,驗證抗LFA-1、Mac-1β亞基(CD18)抗體的分泌能力與特異性,篩選高分泌株系。 產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品針對該細胞的培養(yǎng)與抗體分泌需求優(yōu)化制備,核心特點如下:1. 抗體分泌穩(wěn)定:經(jīng)克隆化篩選,可穩(wěn)定分泌特異性抗LFA-1、Mac-1共同β亞基(CD18)單克隆抗體,抗體效價高、特異性強,可特異性結(jié)合CD18,不與其他免疫分子交叉反應,傳代5–6代后仍保持穩(wěn)定分泌能力,無抗體分泌衰減現(xiàn)象;2. 質(zhì)控嚴格:每批次均通過無菌、支原體、病毒檢測及抗體特異性驗證(ELISA、Western blot、免疫熒光),附完整QC報告,確保細胞純度>98%,無雜細胞污染,抗體與CD18結(jié)合特異性>99%;3. 培養(yǎng)友好:適配常規(guī)細胞培養(yǎng)設(shè)備,培養(yǎng)基配方標準化(含HAT/HT成分),無需額外復雜配制,半貼壁生長特性無需包被培養(yǎng)器皿,復蘇存活率>85%,新手易操作;4. 增殖能力強:可在常規(guī)培養(yǎng)條件下穩(wěn)定增殖,維持指數(shù)生長期,便于大量培養(yǎng)獲取高產(chǎn)量抗CD18抗體,滿足抗體純化與大規(guī)模實驗需求;5. 適配場景廣:可用于CD18蛋白定量檢測、免疫細胞黏附/遷移實驗、炎癥機制研究、免疫抑制劑篩選、Western blot、免疫熒光、免疫組化、抗體純化、診斷試劑研發(fā)及自身免疫性疾病相關(guān)研究,適配多種科研與轉(zhuǎn)化場景;6. 儲存運輸便捷:凍存細胞采用程序降溫,干冰運輸,-196℃液氮可長期保存,復蘇流程簡單,解凍后可快速恢復增殖與抗體分泌能力,適配長期科研實驗需求。
適用樣本類型
本細胞系適配多種免疫學、細胞生物學研究的樣本與實驗體系,適用樣本/實驗場景包括:CD18蛋白檢測(細胞培養(yǎng)上清、血清、免疫細胞裂解液中CD18定量)、抗CD18抗體純化與鑒定、免疫細胞(淋巴細胞、巨噬細胞)黏附及遷移實驗、炎癥模型構(gòu)建(如LPS誘導炎癥)、免疫抑制劑篩選、LFA-1/CD18、Mac-1/CD18信號通路機制研究、免疫熒光與免疫組化實驗、診斷試劑研發(fā)(CD18檢測試劑盒)、基因轉(zhuǎn)染/沉默及細胞共培養(yǎng)實驗。推薦培養(yǎng)體系:常規(guī)T25/T75培養(yǎng)瓶,含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(添加HAT/HT成分、HEPES),37℃、5% CO?培養(yǎng)箱;細胞接種密度1.5×10? cells/cm2,2–3天換液一次,細胞密度達4×10? cells/ml時進行傳代;抗體檢測采用ELISA法(檢測波長450nm)或免疫熒光法,可篩選高分泌株系擴大培養(yǎng)。
備注:(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
(一)儲存條件
1. 凍存細胞需置于-196℃液氮中長期保存,嚴禁-20℃直接冷凍或常溫放置,避免溫度波動導致細胞死亡,影響抗CD18抗體分泌穩(wěn)定性;2. 配套專用雜交瘤細胞培養(yǎng)基(含HAT/HT成分)開封后4℃避光保存,1個月內(nèi)用完;HAT/HT貯備液需分裝后-20℃凍存,避免反復凍融,防止失效;3. 胎牛血清、HEPES、ELISA檢測試劑、免疫熒光染色試劑等需按說明書溫度儲存,抗體檢測及染色相關(guān)試劑避光保存,防止降解影響檢測效果;4. 所有試劑儲存期間避免劇烈震蕩,確保活性穩(wěn)定,稀釋后的HAT/HT溶液密封冷藏,盡快使用,避免影響細胞增殖與抗體分泌。
(二)注意事項
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用,嚴禁用于人體臨床治療或直接注射,操作時嚴格遵循無菌操作規(guī)范,佩戴PPE,避免細胞及培養(yǎng)基接觸皮膚黏膜,尤其處理雜交瘤細胞融合相關(guān)試劑時需加強防護;2. 復蘇時先將凍存管置于37℃水浴快速融化(1–2分鐘),嚴禁反復凍融;接種后靜置4–6小時,輕柔混勻,避免未貼壁細胞流失,確保細胞均勻分布;3. 該細胞為半貼壁生長,傳代時無需yi酶消化,僅需輕柔吹打即可使細胞脫落,避免用力吹打損傷細胞,影響抗CD18抗體分泌能力;4. 培養(yǎng)過程中需確保培養(yǎng)基中HAT/HT成分濃度穩(wěn)定,缺失會導致細胞增殖停滯、死亡;培養(yǎng)基開封后4℃避光保存,1個月內(nèi)用完,HAT/HT貯備液分裝-20℃凍存;5. 培養(yǎng)過程中避免頻繁移動培養(yǎng)瓶,防止細胞脫落,若出現(xiàn)細胞聚團、生長緩慢,及時檢查培養(yǎng)基pH值、血清質(zhì)量與污染情況;6. 廢棄細胞、培養(yǎng)基、耗材按生物安全規(guī)范處理,高壓滅菌后丟棄,尤其抗體檢測、免疫實驗后的廢棄物需雙重消毒;7. 嚴格按說明書操作,若有培養(yǎng)、抗體檢測、免疫實驗相關(guān)問題,可聯(lián)系廠家獲取技術(shù)支持,確保實驗結(jié)果的可靠性,適配CD18相關(guān)炎癥及免疫機制研究。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準。