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激光共聚焦顯微鏡的工作流程介紹
閱讀：136發(fā)布時間：2025-12-21
工作流程如下：
激光聚焦：單色性好的激光束被聚焦到樣品的特定焦平面上，激發(fā)熒光探針產(chǎn)生熒光。
針孔篩選：只有焦平面上的熒光信號能通過探測器前的針孔，來自非焦平面的雜散光會被針孔阻擋，從而獲得較高的圖像對比度。
掃描成像：激光束逐點、逐行掃描整個焦平面，計算機收集信號并重建出二維圖像。通過沿 Z 軸移動樣品，獲取一系列不同深度的切片，然后可重構(gòu)出樣品的三維立體圖像。
激光共聚焦顯微鏡的主要特點：
高分辨率與對比度：有效排除非焦平面干擾，橫向分辨率可達約 120-200nm，成像質(zhì)量遠超傳統(tǒng)寬場熒光顯微鏡。
三維立體成像：無需物理切片即可對樣品進行 “光學切片”，并通過軟件重構(gòu)出三維結(jié)構(gòu)，清晰展現(xiàn)樣品的空間形態(tài)。
多色熒光成像：可配備多種波長的激光器，同時激發(fā)樣品中不同的熒光探針，在同一張圖像上區(qū)分不同的目標結(jié)構(gòu)。
活細胞動態(tài)觀察：對樣品損傷小，可在控溫、控濕等環(huán)境下，長時間實時追蹤活細胞內(nèi)的動態(tài)生理過程。
強大的分析能力：配套軟件可進行圖像增強、細胞計數(shù)、熒光強度定量、共定位分析等多種數(shù)據(jù)處理。
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