點成應用案例 | 結核桿菌培養基的制備過程

結核桿菌培養基的制備過程

結核分枝桿菌，1882年由德國細菌學家Koch（Robert Koch，1843-1910）發現并證明為人類結核病的病原菌，該菌可侵犯全身各器官，其中引起的肺部疾病最為多見，是嚴重影響人類生命健康的傳染病之一，成為了全球尤其是發展中國家最為嚴重的全球性衛生問題。對于結核桿菌的研究，仍是研究人員重點研究內容之一，研究人員往往需要較多的樣本量基礎，相關培養基的批量制備和儲存就尤為重要了。

結核桿菌常用的培養基是羅氏培養基，全稱為羅-琴（Lowenstein-Jensen）培養基。

羅氏培養基的主要組成成分及參考量如下：

磷酸二氫鉀2.4g；一水硫酸鎂0.24g；拘掾酸鎂0.6g；天門冬素3.6g；馬鈴薯淀粉30g；2％孔雀綠水溶液20ml；蒸餾水600ml；甘油12ml；新鮮雞蛋液1000ml

羅氏培養基的制備方法及步驟：

1、       在無菌區間內，將上述材料中的磷酸二氫鉀、硫酸鎂、拘掾酸鎂、天門冬素和甘油溶解與蒸餾水中并加熱

2、       在加熱的同時加入馬鈴薯淀粉并不斷攪拌，在沸水中水熱1小時，再置于56度水浴鍋中水浴1小時；

3、       用肥皂水清洗雞蛋，之后用70%的酒精擦洗，晾干；

4、       無菌條件下打破蛋殼，將蛋白蛋黃裝入滅菌容器中，充分攪拌混勻，之后用無菌紗布進行過濾，得到新鮮雞蛋液；

5、       將雞蛋液加入到一開始準備的混合液中，并加入滅菌的2％孔雀綠水溶液，均勻混合，避免氣泡；

6、       將混合好的溶液分裝到滅菌的試管內并封閉，每支試管液量在6-8ml左右；

7、       將試管放在架子上并保持一定斜度，然后放在蒸汽濃縮器（例如點成TBT-T100IN結核菌培養基制備儀）中，在85℃的水浴中靜置50分鐘來濃縮培養基；

8、       之后取出并放置于4℃冰箱中低溫保存備用；

9、       使用時取出并恢復到室溫，檢查培養基是否污染即可，一般建議一個月內使用。

在制備羅氏培養基的過程中，需要用到一些必要的儀器，如用于消殺病毒細菌的滅菌器、用于恒溫控制的水浴鍋、還有專門用于批量濃縮凝固培養基的蒸汽濃縮器等，點成均可提供以上設備，還可以提供無菌環境的超凈工作臺，滿足實驗需求。

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TBT-T100IN結核菌培養基制備儀

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