樣本的RNA提取前處理有哪些技巧？

RNA提取的成功率，很大程度上取決于起始樣本處理的質量。無論是堅韌的動植物組織，還是脆弱的貼壁細胞，不恰當的處理方式都會導致RNA產量低、純度差甚至降解。本文將詳細講解針對不同類型樣本的前處理技巧，助您從源頭把控實驗質量。

樣本處理的原則

快速：離體樣本的基因表達譜會迅速發生變化，RNA也開始降解。從樣本離體到進入裂解液的時間應盡可能短。

充分：裂解液必須與所有細胞充分接觸，確保細胞膜和核膜被完-全破壞，釋放全部RNA。

低溫：在研磨等未加入強變性裂解液的步驟中，全程保持低溫（如使用液氮）可以抑制內源性RNase的活性。

一、 組織樣本的處理

組織樣本類型多樣，包括動物軟組織（肝、腦）、肌肉組織、富含纖維的植物組織等，處理方法有所不同。

1. 液氮研磨法

這是很經典、高效的方法，適用于絕大多數組織，特別是堅硬或富含RNase的組織。

步驟：

將新鮮或-80°C凍存的組織塊放入盛有足量液氮的研缽中。

用研杵輕輕壓碎組織，然后開始用力研磨。期間要不斷添加液氮，確保組織始終浸沒在液氮中，保持脆硬狀態。

持續研磨直至組織成為細膩的粉末狀，無明顯顆粒感。這一步至關重要，研磨不徹-底將導致裂解不完-全，RNA得率低。

待液氮揮發殆盡但粉末尚未融化時，用預冷的藥匙迅速將粉末轉移至裝有裂解液（如TRIzol）的離心管中，立即渦旋混勻。

2. 勻漿器法（適用于新鮮軟組織）

對于肝臟、腦組織等質地較軟的樣本，可以使用電動或手持勻漿器。

步驟：將新鮮組織剪成小塊，直接放入裝有裂解液的離心管或專用勻漿管中，使用勻漿器高速攪拌，直至看不到組織塊，溶液均一。
注意：勻漿過程會產生熱量，可能導致RNA降解，建議在冰上進行短時、多次勻漿。

3. 特殊樣本的處理

富含脂肪的組織（如腦、脂肪組織）：裂解后，可在加入氯仿（或Dilution Buffer）前，先-進行離心（12,000g，4°C，10分鐘），吸棄上層漂浮的油脂，取下層清液繼續后續步驟。

富含多糖的植物組織（如葉片、塊莖）：多糖會與RNA共沉淀，影響純度。可適當提高裂解液用量，或在沉淀RNA時，使用0.8M檸檬酸鈉/1.2M NaCl溶液代替普通異丙醇進行沉淀，以去除多糖。

二、 細胞樣本的處理

細胞樣本相對簡單，但需根據細胞類型（懸浮/貼壁）和數量調整操作。

1. 懸浮細胞

步驟：收集細胞懸液，離心棄上清，得到細胞沉淀。直接向細胞沉淀中加入裂解液，用移液槍反復吹打至裂解液不再粘稠，清亮透明。確保細胞團塊完-全分散。

2. 貼壁細胞

標準方法：吸盡培養液，用預冷的PBS輕柔清洗一次（沿壁加入，避免沖起細胞），吸盡PBS。直接向培養皿或孔板中加入裂解液，晃動使其覆蓋所有細胞表面，室溫靜置幾分鐘。

裂解與收集：用移液槍反復吹打細胞生長面，直至裂解液變得粘稠且細胞脫落。將裂解液轉移至離心管中。

貼壁牢固的細胞：對于某些貼壁極牢的細胞（如成纖維細胞），吹打可能無法使其完-全脫落。此時可用細胞刮將細胞刮下，或先用胰酶消化細胞，離心收集后再加入裂解液（此方法需注意胰酶處理時間，避免影響RNA質量）。

總結

無論何種樣本，處理的最終目標都是讓裂解液與所有細胞成分充分接觸，釋放RNA并立即滅活RNase。選擇合適的方法并注意細節（低溫、充分、快速），您的RNA提取就成功了一半。
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