重組小鼠巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）的標記過程

來源：上海莼試生物技術有限公司 2026年03月19日 09:45

巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）是一種19.02 kDa的造血生長因子，含有162個氨基酸殘基。該蛋白的活性：形式為同源二聚體，由成骨細胞分泌。M-CSF可控制單核細胞、巨噬細f胞和骨髓祖細胞的生成、分化和功能。M-CSF能夠通過結合其受體CSF-1R激活CSF-1信號通路。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：

①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。

②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2h，棄培養基。

【注】：

①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。

②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100μL培養基，含或不含待測化合物。在CO2培養箱中在37℃下培養細胞24小時。

2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質。

3.在培養箱中將培養板培養適當時間（如6、12、24或48小時）。

4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5.將平板在培養箱中孵育1-4小時。

6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。

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