酪蛋白瓊脂的實驗原理與實驗現象及操作步驟與注意事項！

百歐博偉生物：酪蛋白瓊脂是鑒別微生物是否產酪蛋白酶的選擇性鑒別培養基，原理是利用不溶性酪蛋白被水解后形成透明圈，結合指示劑變色輔助判斷。

一、實驗原理

1、核心生化機制

酪蛋白是大分子不溶性蛋白質，在培養基中呈乳白色渾濁/沉淀狀態。

能產酪蛋白酶（酪蛋白水解酶）的微生物，可將酪蛋白分解為可溶性小分子肽、氨基酸，使菌落周圍培養基變澄清，形成透明圈。

培養基含溴麝香草酚藍（BTB）指示劑：初始 pH 7.4 呈綠色；細菌代謝產酸使 pH 下降，培養基由綠變藍，輔助判斷生長與代謝。

2、培養基成分與作用

二、實驗操作（簡要）

制備/取用平板：滅菌后傾注平皿，冷卻后呈綠色、有沉淀。

接種：劃線或點種待測菌。

培養：30–36℃倒置培養24 小時。

觀察：記錄菌落形態、透明圈、培養基顏色。

三、典型實驗現象與結果判斷

1、陽性結果（產酪蛋白酶）

現象：菌落周圍出現清晰透明圈，培養基由綠變藍。

代表菌：蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌。

2、陰性結果（不產酪蛋白酶）

現象：菌落周圍無透明圈，僅菌落生長，培養基由綠變藍。

代表菌：大腸埃希氏菌。

3、質控菌株參考（30±1℃，24h）

四、注意事項

培養基需充分搖勻再傾注，保證酪蛋白分布均勻，避免透明圈誤判。

培養溫度與時間嚴格控制，防止假陽性/假陰性。

透明圈觀察以菌落邊緣清晰、培養基澄清為準。

溴麝香草酚藍變色僅反映代謝產酸，不直接等同于酪蛋白水解。

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