仙臺病毒PCR檢測方法

仙臺病毒的PCR檢測方法

仙臺病毒的生物學特點

仙臺病毒(1953年在日本仙臺發現，命名為Fushimi株。仙臺病毒(Sendai virus)屬于副黏病毒科、呼吸道病毒屬病毒，是具有包膜的病毒，病毒核酸為單股負鏈RNA，基因組長度15 384個核苷酸，基因組編碼6個結構蛋白：核殼蛋白(N)，磷蛋白(P)，基質蛋白(M)，融合蛋白(F)，血凝素·神經氨酸酶(HN)和大蛋白(Large protein,L)，和一個非結構蛋白C，其中L蛋白具有高度保守性。

仙臺病毒可引起嚙齒類動物呼吸系統疾病，仙臺病毒傳染性強，在多數情況下呈隱性感染，改變體內細胞免疫反應，藥效學實驗結果，干擾實驗結果，且被仙臺病毒感染的動物群很難凈化。仙臺病毒是國標中大鼠小鼠等實驗動物的必檢項目，必須排除。為確保實驗動物質量符合標準，建立一種快速準確的檢測方法就顯得尤為重要。

仙臺病毒的傳統檢測方案

仙臺病毒的檢測利用抗原檢測仙臺病毒抗體（ELISA)，仙臺病毒SV可以凝集雞和豚鼠紅細胞(血液凝集反應)，凝集作用可以被仙臺病毒抗體抑制。

但ELISA存在檢測耗時較長，包被抗原較難制備，需要免疫動物制備陽性血清等問題，較為繁瑣。

仙臺病毒的PCR檢測方案

目前，針對仙臺病毒的新的分子生物學檢測方案是針對核酸RNA的檢測方案。如PCR和熒光定量PCR。基礎都是檢測RNA病毒的核酸序列，且核酸出現擴增和繁殖的時間比產生抗體的時間提前，方便早檢測、早篩查、早處理。

實時熒光定量PCR（qPCR)方法有靈敏度較高、直接檢測病毒核酸并可以對核酸濃度定量檢測等優點。能夠快捷、準確地檢測樣本中仙臺病毒的核酸含量。

翼和生物開發的多種病毒鑒定試劑盒——Ⅲ型呼腸孤病毒Reo-3、仙臺病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV多重qPCR鑒別試劑盒，包含仙臺病毒SV。試劑盒采用多套引物探針，在FAM（Ⅲ型呼腸孤病毒 Reo-3）， HEX（仙臺病毒SV），ROX（小鼠肝炎病毒 MHV）三個通道檢測3種病毒，另外一套引物探針在CY5通道檢測內參RNA。該試劑盒具有以下特點：

靈敏：檢測靈敏度較高，10 copies/μL可被有效檢出。

穩定：全程閉管操作，無交叉污染。

可靠：含內參對照，避免假陰性。

方便：操作簡單，一步法檢測。

對該方法的特異性、穩定性、重復性、靈敏度進行驗證，效果明顯。