賽默飛色譜及質譜
【藥典】生物藥-陰離子交換-親水混合色譜的GlyPaCAXH色譜柱分析人促紅細胞生成素（EPO)N糖
檢測樣品：重組人促紅細胞生成素(EPO)
檢測項目：N糖唾液酸分布
方案概述：本文考察使用PNG酶，對比非還原酶切和二硫蘇糖醇（DTT）還原條件下酶切人促紅細胞生成素（EPO）的N糖，使用2-AB標記后在陰離子交換和親水相互作用雙模式下的GlycanPacAXH色譜柱上的以唾液酸數目差異進行分組分離的結果差異。為高唾液酸化的蛋白的N糖分析提供參考。
重組人促紅細胞生成素（EPO）廣泛應用于治療腎性貧血以及 腫瘤等各種慢性疾病所伴發的貧血。EPO 是一種單鏈的酸性糖 蛋白，分子量為 32000-39000Dar,EPO 的糖基包括 3 個 N2 糖 鏈（分別位于 Asp 24，Asp 38，Asp 83）和一個 O 糖鏈（位 于 Ser126）。他們的主要成分是甘露糖，巖藻糖和唾液酸等 [1]。 其中，唾液酸在維持 EPO 分子的酸性，阻斷細胞表面半乳糖受 體結合，防止 EPO 失活等方面有重要作用 [2]。本文采用了非還 原酶切和 DTT 還原酶切 N 糖鏈， 2-AB 標記后，經過 Hypersep AminoPropyl 小柱凈化后的糖鏈樣品，在 Glypac AXH 的 HPLC 和 UHPLC 色譜柱上進行分析。 Glypac AXH 混合模式色譜柱通過獨特的陰離子交換和 HILIC 雙 重模式，可以將 N 糖按照唾液酸數目大小進行分組分離，比單 純的 HILIC 模式色譜柱給出更豐富的唾液酸分布信息，非常適 合用于 EPO 類高唾液酸化的蛋白的 N 糖唾液酸分布測定。
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